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DNA研究篇(血漿樣本)

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用于提取游離DNA的血漿樣本,若采用streck管采集保存,常溫運(yùn)輸,盡快送至實(shí)驗(yàn)室。

注意:不要?jiǎng)×艺鹗幓驌u晃,以免造成細(xì)胞破裂,造成大片段污染。

若為EDTA抗凝管采集,在2小時(shí)內(nèi)完成血漿分離(參照以下血漿處理方法),并轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存,不得反復(fù)凍融。


血漿處理方法:

取出血液樣本,對(duì)稱放于適配器內(nèi)進(jìn)行離心,1,600g,4℃離心10min。離心后血液分為三層,上層的是血漿,中間的是白細(xì)胞層,下層的是紅細(xì)胞層,如圖所示。 


image.png


用移液器分別吸取血漿、白細(xì)胞層、紅細(xì)胞至不同的凍存管中。

注:白細(xì)胞層為極薄的一層,為了不影響白細(xì)胞的量,在分離血漿時(shí)取至白細(xì)胞層以上3-4mm處為宜。在吸取白細(xì)胞層時(shí),將上層剩下的血漿及白細(xì)胞層以下3-4mm內(nèi)的紅細(xì)胞層都吸取。血漿中含有游離核酸,為去除殘余細(xì)胞中核酸對(duì)游離核酸的干擾,應(yīng)將血漿進(jìn)行二次離心。將血漿在4℃條件下以16,000 g離心10分鐘。

血漿根據(jù)后續(xù)的實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行分裝,每管樣本量為單次實(shí)驗(yàn)所需的量為宜,如300-500μL /管。 


注意事項(xiàng): 

1) 推薦EDTA抗凝處理,盡量避免肝素抗凝血,已有研究報(bào)道認(rèn)為高濃度肝素對(duì)后續(xù)酶學(xué)反應(yīng)有抑制作用,可能會(huì)造成檢測(cè)失敗。 

2) 分離血漿的過(guò)程盡量在冰上操作,以維持血細(xì)胞的完整性。 

3) 整個(gè)分離操作應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)完成。


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