CUT&Tag(Cleavage Under Targets and Tagmentation, CUT&Tag)是一種研究蛋白質與DNA互作的新方法。該方法通過分子生物學手段將高活性的Tn5轉座酶與Protein A融合,并裝載建庫接頭引物形成pA-Tn5轉座復合物。在抗體的引導下該pA-Tn5轉座復合物可靶向切割目的蛋白附近的DNA序列。
技術優勢
與傳統ChIP-Seq相比,該技術具有以下優勢:
1) 它不需要使用甲醛交聯以及免疫共沉淀,而是通過針對靶蛋白或轉錄因子等的抗體和 Protein G/A 的介導,使得與 Protein G/A 融合的 Tn5 酶在切割 DNA 片段的同時在序列兩端加上測序接頭,經過 PCR 擴增后形成可以直接用于高通量測序的文庫;
2) 該技術無需交聯與超聲打斷操作,規避了其所引起的抗原決定簇遮蓋和樣本損失問題,提高了信噪比,并且極大地降低了樣本起始量,最低僅需60個細胞即可完成實驗。
應用范圍
CUT&Tag技術可從基因組范圍內檢測組蛋白、RNA polymerase II和轉錄因子等蛋白質結合的DNA區域,應用于臨床和科研的表觀遺傳學研究。或是結合生物信息學分析,找到轉錄因子下游調控的靶基因,為進一步闡明生物學機制提供依據。
實驗流程

樣本要求
? 細胞樣本:數目大于60。上海周邊地區可以送貼壁或懸浮細胞,常溫運輸。
? 動物組織:質量大于10mg。組織需要新鮮,無血管無結締組織等雜質。-80度凍存,干冰運輸。
? 動物組織:質量大于500mg,錫紙包裹,液氮凍存,干冰運輸。
生物信息分析流程

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