
10x Genomics具有通量高、靈活性強、流程簡單、技術性能高、單個細胞制備成本低等優勢,其技術核心是油滴包裹的凝膠珠(GEM),該系統有75萬種barcoded beads,每個bead上有40-80萬探針。
技術要點
> 8通道的微流體“雙十字”交叉系統
> 含Barcoded RT Primers的Gel Beads、細胞和酶的混合物、油
> 三者結合形成GEMs,即包裹Gel Beads、細胞和酶的混合物的油滴
> GEMs被收集(單細胞捕獲率≈65%)
技術流程
>GEM形成后,細胞裂解,凝膠珠自動溶解釋放大量barcode序列,隨后mRNA逆轉錄產生帶有Barcode和UMI信息的cDNA。
>油滴破碎,cDNA為模板進行PCR擴增,然后進行cDNA打斷、加測序接頭P5及測序引物R1等傳統二代測序的建庫過程。
>測序后,得到每個細胞的轉錄組表達譜,Barcode標記細胞,UMI標記基因并記錄表達量。